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凍存管該如何進行冷凍呢?看看本篇吧
發布時間:2022-08-17   點擊次數:154次
  凍存管又稱菌種保存管、磁珠保存管、磁珠凍存管。微生物實驗室常用的菌種保存方法有牛奶法、甘油法、斜面法等。復雜程度各異,效果也差別很大。
 
  凍存管的使用是一門學問,并不是打開液氮罐、放入凍存管、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的??茖W正確地使用凍存管,可以避免樣本的損失,并保護試驗人員的安全。
 
  下面讓我們一起來了解一下凍存管的冷凍步驟吧
 
  用預熱的PBS溶液洗滌細胞,吸取溶液,含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆蓋細胞(薄薄的液層足夠,胰蛋白酶和EDTA的濃度需要根據細胞系確定)。
 
  37℃孵育細胞3-5分鐘。
 
  細胞從底部脫離之后,終止孵育,加入含有血清的培養基,用移液器輕輕地懸浮細胞。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘),用含有血清的培養基重新懸浮。
 
  細胞計數。
 
  離心細胞懸液(500xg,5分鐘),去除上清液,用適量體積的含有血清的培養基重新懸浮細胞。
 
  以1:1體積比混合細胞和凍存液(60%培養基,20%胎牛血清,20%DMSO),然后轉移到Cryo.sTM凍存管中。凍存的細胞密度為1-5×106個/毫升。
 
  含有細胞的Cryo.sTM凍存管建議以−1K/min的速率降溫,可以將凍存管置于−70℃含有異丙醇的容器中。如果Cryo.sTM凍存管存儲其他樣品,可以直接放置在−20℃,−70℃或者液氮的氣相。
 
  為了確保樣品冷凍均勻,4mL和5mL的Cryo.sTM凍存管需要先置于在−20℃冰箱過夜,然后再轉移到−70℃或者液氮的氣相。
 
  然后轉移Cryo.sTM凍存管到液氮罐。為了避免污染(如支原體)和安全考慮,請將Cryo.sTM凍存管置于液氮的氣相,切勿置于液相。

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